Análise de Legionella pneumophila – Quantificação: importância, métodos e controle em sistemas de água
Introdução
A análise de Legionella pneumophila – quantificação é um ensaio microbiológico utilizado para avaliar a presença e a concentração desse microrganismo em sistemas de água.
A investigação é especialmente relevante em instalações que apresentam condições favoráveis à multiplicação da bactéria e à formação de aerossóis, como redes prediais de água, chuveiros, torres de resfriamento, sistemas de água quente, fontes ornamentais e determinados equipamentos que utilizam água.
A Legionella pneumophila merece atenção porque está relacionada à doença dos legionários, uma forma de pneumonia que pode apresentar maior gravidade principalmente em pessoas suscetíveis.
A Organização Mundial da Saúde (OMS) aponta a L. pneumophila como a principal espécie associada aos casos e surtos de legionelose transmitidos pela água.
Por esse motivo, a análise quantitativa pode integrar estratégias de avaliação de risco, investigação de contaminações, acompanhamento de medidas corretivas e programas de gerenciamento da qualidade microbiológica da água.
O que é Legionella pneumophila?
Legionella pneumophila é uma bactéria encontrada naturalmente em ambientes aquáticos.
Em ambientes naturais, normalmente está presente em concentrações relativamente baixas.
O problema ocorre quando o microrganismo encontra condições adequadas para se multiplicar dentro de sistemas artificiais de água.
Segundo o CDC, fatores como biofilmes, temperaturas favoráveis, baixa concentração de desinfetante e períodos de pouca circulação ou estagnação da água podem favorecer a sobrevivência e a multiplicação de Legionella.
A OMS informa que espécies do gênero podem proliferar principalmente em temperaturas entre aproximadamente 20 °C e 50 °C, estando frequentemente relacionadas a biofilmes, sedimentos e outros ambientes capazes de oferecer proteção e nutrientes para a bactéria.
Entre os sistemas que merecem atenção estão:
chuveiros e torneiras;
sistemas de água quente;
redes hidráulicas extensas e complexas;
torres de resfriamento;
spas e banheiras de hidromassagem;
fontes ornamentais;
reservatórios e tubulações;
equipamentos capazes de gerar névoas ou aerossóis.
A presença da bactéria no sistema não significa, isoladamente, que ocorrerá uma infecção.
O risco depende de diferentes fatores, incluindo sua concentração, as características do sistema, a capacidade de produção e dispersão de aerossóis e a suscetibilidade das pessoas expostas.
Por que realizar a quantificação de Legionella pneumophila?
Enquanto uma análise qualitativa busca responder principalmente se determinado microrganismo foi ou não detectado, a análise quantitativa de Legionella pneumophila fornece informações sobre sua concentração na amostra analisada.
Essa informação pode ser importante para avaliar tendências ao longo do tempo e verificar se as condições de controle de um sistema estão funcionando adequadamente.
A quantificação pode auxiliar, por exemplo, em situações de:
monitoramento de sistemas de água;
avaliação de redes prediais;
investigação de possível colonização microbiológica;
verificação da eficácia de procedimentos de limpeza e desinfecção;
acompanhamento após ações corretivas;
programas de gerenciamento de risco;
investigações relacionadas a possíveis fontes ambientais de exposição.
O CDC destaca que a amostragem ambiental permite identificar a localização, a extensão e os tipos de Legionella presentes em um sistema, além de ser útil para verificar se medidas de remediação foram efetivas.
É importante observar, entretanto, que o resultado laboratorial não deve ser interpretado isoladamente.
Devem ser considerados o tipo de instalação, o histórico de resultados, os pontos de coleta, as características do sistema e os critérios técnicos ou regulamentares aplicáveis à situação.
Como é realizada a análise quantitativa de Legionella pneumophila?
Um dos principais métodos de referência para a análise de Legionella em água é o método de cultivo estabelecido pela ISO 11731:2017 — Water quality — Enumeration of Legionella.
A norma especifica métodos de cultivo destinados ao isolamento de Legionella e à estimativa de sua quantidade em amostras de água.
Sua aplicação inclui diferentes tipos de água, como água potável, industrial, natural e residuária, além de matrizes relacionadas, como biofilmes e sedimentos.
Dependendo das características da amostra e da concentração esperada do microrganismo, etapas de concentração podem ser utilizadas.
A filtração por membrana, por exemplo, permite processar volumes maiores quando se espera uma baixa concentração de bactérias.
Após o preparo da amostra, são empregados meios de cultura apropriados para favorecer o desenvolvimento de Legionella e reduzir a interferência de outros microrganismos.
As colônias suspeitas são então submetidas aos procedimentos de confirmação previstos pelo método utilizado.
Em análises baseadas em cultivo, o resultado é geralmente expresso em UFC por unidade de volume, sendo UFC a sigla para unidades formadoras de colônia.
Documentos técnicos da Coordenação-Geral de Acreditação do Inmetro inclusive relacionam a ISO 11731 como referência para a determinação quantitativa de Legionella spp. por técnica de membrana filtrante.
Cultura e métodos moleculares são a mesma coisa?
Não. Métodos moleculares, como a PCR quantitativa — qPCR — também podem ser empregados na investigação de Legionella, mas o princípio analítico é diferente.
O cultivo procura detectar bactérias viáveis capazes de formar colônias, enquanto métodos de amplificação de ácidos nucleicos detectam DNA ou RNA específico do microrganismo.
O CDC destaca que os resultados por cultura são normalmente expressos em unidades formadoras de colônia por volume.
Já métodos de amplificação de ácidos nucleicos podem apresentar resultados em unidades genômicas e, dependendo do método, podem não diferenciar completamente células vivas de células mortas.
Por esse motivo, UFC e unidades genômicas não devem ser consideradas diretamente equivalentes.
A escolha do método deve, portanto, considerar o objetivo do monitoramento e os requisitos técnicos aplicáveis.
A importância da coleta da amostra
A qualidade do resultado começa antes de a amostra chegar ao laboratório. A estratégia de amostragem deve considerar a estrutura da instalação e identificar pontos que realmente representem possíveis áreas de multiplicação ou exposição.
Entre os locais que podem ser avaliados estão pontos de uso, reservatórios, água quente, linhas de retorno, chuveiros, torneiras, torres de resfriamento e outros componentes do sistema.
Durante investigações ambientais, o CDC indica que a definição dos pontos deve levar em consideração características da rede, locais representativos de uso e condições capazes de favorecer o crescimento da bactéria.
Para água potável, a coleta de aproximadamente um litro é frequentemente utilizada quando possível, embora o volume necessário dependa do objetivo e do método empregado.
Recipientes apropriados, preservação da amostra, tempo de transporte e condições de armazenamento também precisam ser observados.
Uma coleta inadequada pode gerar resultados que não representam corretamente o sistema avaliado.
Como interpretar o resultado da quantificação?
A interpretação da análise de Legionella pneumophila – Quant. não deve se limitar à leitura de um número.
A concentração encontrada deve ser relacionada a fatores como:
tipo de sistema de água;
finalidade da instalação;
população potencialmente exposta;
ponto em que a amostra foi coletada;
histórico de monitoramento;
temperatura da água;
presença e concentração de desinfetantes;
ocorrência de estagnação;
existência de biofilmes;
medidas preventivas já adotadas.
A presença ou concentração de Legionella também não representa, isoladamente, uma estimativa direta da probabilidade de uma pessoa desenvolver legionelose.
O CDC observa que o risco depende de outros fatores, como a capacidade da fonte de produzir aerossóis, a proximidade das pessoas expostas e suas características individuais.
Por esse motivo, valores de referência ou níveis de ação devem ser avaliados de acordo com a regulamentação, protocolo ou plano de gerenciamento específico aplicável ao sistema analisado, evitando a aplicação indiscriminada de um único limite a todas as situações.
Legionella pneumophila e a legislação brasileira
No Brasil, a Portaria GM/MS nº 888/2021, que atualizou o Anexo XX da Portaria de Consolidação GM/MS nº 5/2017, estabelece procedimentos relacionados ao controle e à vigilância da qualidade da água para consumo humano e ao padrão de potabilidade.
A Portaria determina ainda que as metodologias analíticas empregadas na avaliação dos parâmetros de qualidade da água atendam a referências nacionais ou internacionais reconhecidas, incluindo métodos publicados pela ISO, Standard Methods, USEPA e OMS, conforme aplicável.
Para Legionella, a interpretação deve considerar também a finalidade do sistema, requisitos específicos do empreendimento, normas técnicas e eventuais critérios sanitários, ocupacionais ou contratuais aplicáveis.
Assim, o planejamento analítico deve ser realizado caso a caso.
Como reduzir o risco de proliferação de Legionella?
O controle não depende apenas das análises laboratoriais. O monitoramento deve fazer parte de uma estratégia mais ampla de gerenciamento do sistema.
Entre as principais medidas preventivas estão a manutenção adequada das instalações, controle de temperatura, redução de pontos de estagnação, limpeza e desinfecção periódicas e manutenção das condições adequadas de tratamento da água.
A OMS destaca a importância da manutenção, limpeza, desinfecção e controle dos sistemas de água, enquanto o CDC recomenda programas de gerenciamento capazes de identificar condições que favoreçam o crescimento e a disseminação da bactéria.
Resultados sucessivos da análise laboratorial também podem ser utilizados para acompanhar tendências e verificar se as ações implantadas estão produzindo o efeito esperado.
Quando solicitar a análise quantitativa de Legionella pneumophila?
A análise pode ser considerada quando existe necessidade de avaliar a situação microbiológica de um sistema de água ou acompanhar medidas de controle.
Ela pode ser especialmente relevante para hotéis, hospitais, clínicas, indústrias, edifícios comerciais, instalações com torres de resfriamento, centros esportivos, estabelecimentos com sistemas de água quente e outros ambientes nos quais exista possibilidade de formação de aerossóis.
Também pode ser solicitada após intervenções no sistema, períodos prolongados de baixa utilização, suspeita de contaminação ou execução de procedimentos de sanitização, conforme o programa de gerenciamento adotado.
Conclusão
A análise quantitativa de Legionella pneumophila é uma ferramenta importante para avaliar a presença e a concentração dessa bactéria em sistemas de água.
Mais do que identificar o microrganismo, a quantificação contribui para acompanhar o comportamento microbiológico do sistema, verificar tendências e fornecer informações para programas de prevenção e controle.
Para que os resultados sejam confiáveis, entretanto, é fundamental que todas as etapas — desde a escolha dos pontos de coleta até o processamento da amostra e a interpretação final — sejam executadas com critérios técnicos adequados.
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FAQ – Perguntas frequentes
O que significa quantificação de Legionella pneumophila?
Significa determinar a concentração do microrganismo presente em determinada amostra, e não apenas informar sua presença ou ausência.
Qual é a diferença entre Legionella spp. e Legionella pneumophila?
Legionella spp. refere-se ao conjunto de espécies pertencentes ao gênero Legionella. Legionella pneumophila é uma espécie específica e é a principal associada à doença dos legionários transmitida por sistemas de água.
Onde Legionella pneumophila pode ser encontrada?
Pode ocorrer em sistemas de água prediais, redes de água quente, chuveiros, torneiras, torres de resfriamento, spas, fontes ornamentais e outros sistemas capazes de favorecer sua multiplicação.
A presença de Legionella pneumophila significa que alguém ficará doente?
Não necessariamente. O risco depende da concentração, da formação e dispersão de aerossóis, das características do sistema e da susceptibilidade das pessoas expostas.
Qual método pode ser utilizado para quantificar Legionella?
A ISO 11731:2017 é uma importante referência internacional e descreve métodos de cultivo para isolamento e enumeração de Legionella em amostras de água.
PCR e cultura apresentam o mesmo resultado?
Não. A cultura avalia bactérias viáveis capazes de formar colônias, enquanto a PCR detecta material genético. Por isso, os resultados e as unidades utilizadas pelos dois métodos não são diretamente equivalentes.
A análise pode ser realizada depois da sanitização de um sistema?
Sim. O monitoramento após ações de limpeza ou desinfecção pode auxiliar na avaliação da eficácia das medidas implantadas, observando-se o período e o plano de amostragem adequados.
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